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哪些因素會(huì)影響Elisa試劑盒的測定結(jié)果?
點(diǎn)擊次數(shù):661 更新時(shí)間:2021-03-26
  Elisa試劑盒被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定,具有靈敏度高,操作簡略等優(yōu)點(diǎn),但是在詳細(xì)實(shí)驗(yàn)過程中影響要素較多,而且要按照嚴(yán)厲的闡明要求,在臨床檢驗(yàn)中除正常反響外,有時(shí)??梢姷叫╁e(cuò)誤成果(即假陽性或假陰性成果)。
 
  影響ELISA測定錯(cuò)誤成果的原因主要有:
 
 ?、贅?biāo)本要素;
 
 ?、谠噭┮?
 
 ?、鄄僮饕亍?br /> 
  一、類風(fēng)濕因子
 
  人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)能夠與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶符號(hào)二抗的FC段直接結(jié)合,然后導(dǎo)致假陽性。
 
  解決辦法:
 
  .用F(ab)2替代完好的IgG;
 
  2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,0 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有用);
 
  3.檢測抗原時(shí),能夠用2-巰基yi醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。
 
  二、補(bǔ)體
 
  ELISA系統(tǒng)中固相抗和符號(hào)二抗過程中,抗體分子發(fā)作變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體Cq分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,使Cq 能夠?qū)⒍哌B接起來,然后形成假陽性。
 
  解決辦法:
 
  .用EDTA稀釋標(biāo)本;
 
  2.用53℃,0 min或56℃,30 min加熱血清使Cq滅活。
 
  三、嗜異性抗體
 
  人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig(s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中抗和二抗連接起來,也能形成假陽性。
 
  解決辦法:
 
  可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig(s),但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
 
  四、嗜靶抗原的本身抗體
 
  抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定成果。
 
  解決辦法:
 
  測定需用理化方法將其解離后再測定

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